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    在制備干粉培養基的過程中,應該注意什么?

    更新時間:2019-11-19      點擊次數:2142
         干粉培養基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料,一般都含有水、氮源、無機鹽(包括微量元素)、碳源、生長因子(維生素、氨基酸、堿基、抗菌素、色素、激素和血清等)等。
     
        干粉培養基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養基在受熱、吸潮后,易被細菌污染或分解變質,因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養基(如組織培養基),較長時間的貯存,必須放在3-6℃的冰箱內。由于液體培養基不易長期保管,均改制成粉末。
     
        干粉培養基若采用不適當的加熱和滅菌條件,有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或 pH 的改變。因此,培養基應采用驗證的滅菌程序滅菌,培養基滅菌方法和條件,應通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證。此外,對高壓滅菌器的蒸汽循環系統也要加以驗證,以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致干粉培養基的過熱,過度滅菌可能會破壞絕大多數的細菌和真菌培養基促生長的質量。滅菌器中培養基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此,應根據滅菌培養基的特性,進行全面的滅菌程序驗證。
     
        在制備干粉培養基的過程中,要使用一些玻璃器皿,如試管、三角瓶、培養皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據不同的情況,經過一定的處理,洗刷干凈。干粉培養基有的還要進行包裝,經過滅菌等準備就緒后,才能使用。
     
        1、新購的玻璃器皿
     
        除去包裝沾染的污垢后,先用熱肥皂水刷洗,流水沖凈,再浸泡于1~2%的工業鹽酸中數小時,使游離的堿性物質除去,再以流水沖凈。對容量較大的器皿,如大燒瓶、量筒等,洗凈后注入濃鹽酸少許,轉動容器使其內部表面均沾有鹽酸,數分鐘后傾去鹽酸,再以流水沖凈,倒置于洗滌架上將水空干,即可使用。
     
        2、用過的玻璃器皿
     
        凡確無病原菌或未被帶菌物污染的器皿,使用后可隨時沖洗,吸取過化學試劑的吸管,可先浸泡于清水中,待到一定數量后再集中進行清洗。有可能被病原菌污染的器皿,必須經過適當消毒后,將污垢除去,用皂液洗刷,再用流水沖洗干凈。若用皂液未能洗凈的器皿,可用洗液浸泡適當時間后再用清水洗凈。洗液的主要成份是重鉻酸鉀和濃流酸,其作用是將有機物氧化成可溶性物質,以便沖洗。洗液有很強的腐蝕作用,使用時應特別小心,避免濺到衣服、身體和其他物品上。
     
        應確定每批干粉培養基滅菌后的 pH(冷卻至室溫 25℃測定)。若培養基處方中列出 pH 的范圍,除非經驗證表明培養基的 pH 允許的變化范圍很寬,否則,pH的范圍不能超過規定的±0.2。
     
        制成平板或分裝于試管的培養基應進行下列檢查:容器和蓋子不得破裂,裝量應相同,盡量避免形成氣泡,固體培養基表面不得產生裂縫或漣漪,干粉培養基在冷藏溫度下不得形成結晶,不得污染微生物等。應檢查和記錄批數量、有效期及培養基的無菌檢查。
     
        培養基的貯存
     
        自配的培養基應標記名稱、批號、配制日期等信息,并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養基標簽上應標有名稱、批號、生產日期、失效期及培養基的有關特性,生產商和使用者應根據培養基使用說明書上的要求進行保存,所采用的保藏和運輸條件應使成品培養基限度的失去水分并提供機械保護。
     
        干粉培養基菌后若儲藏在高壓滅菌器中,質量可能會受影響,一般不提倡這種存放法。瓊脂培養基不得在 0℃或 0℃以下存放,因為冷凍可能破壞凝膠特性。
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